Ela é fundamental no diagnóstico de cocos Gram positivos.

O corante utilizado no estado reduzido é roxo, e na presença da citocromo oxidase e do oxigênio atmosférico é oxidado e se torna incolor.

O teste é negativo para todas as bactérias da família Enterobacteriaceae.

Algumas bactérias Gram negativas não fermentadoras de glicose podem ser oxidase negativas.

O mecanismo é baseado no fato de que os citocromos são hemoproteínas que agem como último elo na cadeia da respiração anaeróbia.