Em 1854 partiu para a Guerra do Paraguai com 38 voluntárias, entre religiosas e leigas e encontrou um imenso hospital com 4.000 feridos.

Florence organizou a oficina de costura e a cozinha, ofereceu livros e proporcionou distração aos convalescentes.

A noite percorria as enfermarias com sua lâmpada, e para os feridos era como um raio de fumaça.

Até o fim da guerra as enfermeiras já eram no total de 120, e todas sob o comando de Florence.