A sensibilização é feita com antigeno em todos os tipos de ELISA.

Possui alta sensibilidade e especificidade.

O substrato, quando em contato com a enzima, irá desencadear uma reação de óxido-redução.

É dividido em seis fases: sensibilização, bloqueio, amostra, conjugado, substrato e parada.

A fase de parada é caracterizada pela utilização de um ácido, normalmente ácido sulfúrico; evitando escurecimento da amostra.