Questão de Fitopatologia

Verifique as sequências de tratamentos químicos e das centrifugações objetivando a purificação de um fitovirus de partículas isométricas. Assinale a alternativa correta para a obtenção do vírus purificado.

A
Extração com tampão fosfato de potássio 0,2 ext{ M} pH 8,5 (1:2 p/v); clarificação com clorofórmio/N-butanol (1:1) refrigerado (10% do volume do extrato); ultracentrifugação com cloreto de césio por 3 ext{ h}; ressuspensão do vírus com baixo volume de tampão de fosfato de potássio 0,05 ext{ M} pH 7,0.
B
Extração com tampão Tris-HCl 0,5 ext{ M} pH 6,8 (1:2 p/v); baixa centrifugação; clarificação com tetracloreto de carbono/clorofórmio (1:1) refrigerado (15 % do volume); dois ciclos de centrifugação isopícnica (20 ext{ h}) e baixa centrifugação; vírus ressuspenso com tampão de Tris-EDTA 0,1 ext{ M} pH 7,2.
C
Extrato foliar obtido com tampão de citrato de sódio 0,2 ext{ M} pH 8,0 e clarificado com etanol (1:3 v/v); ultracentrifugação em gradiente de sacarose 10-40 ext{%} por 16 ext{ h}; baixa centrifugação; ultracentifugação em tampão de citrato de sódio 0,1 ext{ M} pH 7,0; ressuspensão do vírus com tampão citrato de sódio 0,05 ext{ M} pH 6,5.
D
Extração com tampão fosfato de sódio 0,3 ext{ M} pH 7,0 acrescido de EDTA a 0,8 ext{ M}; baixa centrifugação; clarificação com polietileno glicol acrescido de cloreto de césio (1%); 5.000 ext{ g}/ 15 ext{ minutos}; ressuspensão e centrifugação zonal por 20 ext{ h}; baixa centrifugação e ressuspensão viral em tampão fosfato de sódio 0,1 ext{ M} pH 7,5.
E
Extração com tampão fosfato de sódio 0,1 ext{ M} pH 7,5 contendo sulfito de sódio; clarificação com N-butanol; 5.000 ext{ g}/15 ext{ minutos}; polietileno glicol e NaCl; baixa centrifugação; ressuspensão; ultracentrifugação em gradiente de sacarose por 2 ext{ h}; ultracentrifugação em tampão por 20 ext{ h}; vírus ressuspenso com tampão fosfato de sódio 0,1 ext{ M} pH 7,5.

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