O objetivo principal de uma validação é demonstrar que o método é apropriado para a finalidade pretendida, ou seja, uma determinação qualitativa, semi-quantitativa e/ou quantitativa de fármacos e outras substâncias em produtos diversos, dentro deste processo utiliza-se as substâncias de referência. As substâncias de referência utilizadas na validação de um método bioanalítico podem ser:

1. referências oficializadas pela Farmacopeia Brasileira.
2. padrões secundários, desde que a identidade e o teor sejam devidamente comprovados.
3. substâncias sintetizadas em laboratório de pesquisa com alto índice de recuperação.
4. o sal do princípio ativo utilizado na produção do medicamento.